معلومة

استخراج الحمض النووي من هلام الاغاروز

استخراج الحمض النووي من هلام الاغاروز


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

نظرًا لأن الحمض النووي قابل للذوبان في الماء ، فهل من الممكن استخلاص منتج PCR عن طريق إذابة الجل المستأصل الذي يحتوي على شريط الحمض النووي بالطول المطلوب في الماء ، وهرس قطعة الهلام بمدقة ، ثم طردها بالطرد المركزي ثم سحب المادة الطافية؟


نعم ، هذا ممكن (وقد فعلت ذلك بعدد لا يحصى من المرات) - الطريقة تسمى "التجميد والضغط". ما تفعله أساسًا هو تشغيل الجل ، وقطع النطاق الذي يهمك (كن حذرًا من ضوء الأشعة فوق البنفسجية ، فهو يتسبب في تلف الحمض النووي وأيضًا حروق الشمس ، لذلك ارتدِ الواقي المناسب لوجهك) ، ثم قم بإذابه في المخزن المؤقت ، ثم قم بتجميده في النيتروجين السائل (أو -70 درجة مئوية ، لا يهم) وطرده في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. خلال هذا الوقت يذوب الجليد وتكون حبيبات الاغاروز في القاع. خذ المادة الطافية ، قم بترسيب الإيثانول (مع الجليكوجين عندما يكون لديك القليل من الحمض النووي فقط) ولديك حمض نووي لطيف ونظيف. لا حاجة إلى مجموعات باهظة الثمن ويتم إجراؤها في غضون ساعتين تقريبًا.

يمكنك العثور على بروتوكول جميل ومفصل للغاية هنا: "شطف الحمض النووي من Agarose Gels" (باقي الكتيب مفيد جدًا أيضًا).


عزل الحمض النووي (خطوات الاستخراج) والفرز (الاغاروز الكهربائي للهلام)

التكنولوجيا الحيوية هي استخدام الأساليب الاصطناعية لتعديل المادة الوراثية للكائنات الحية أو الخلايا لإنتاج مركبات جديدة أو لأداء وظائف جديدة.

لتحقيق ذلك يجب أن يكون علماء التكنولوجيا الحيوية قادرين على ذلك مقتطف, معالجة، و تحليل الأحماض النووية.


الحمض النووي هو التركيب الحلزوني المزدوج الذي تقطعت به السبل والذي يحمل المعلومات الجينية. ستعطينا دراسة جزيء الحمض النووي تفاصيل حول الحياة. يمكن استخلاص جزيئات الحمض النووي من الخلية باستخدام تقنيات الاستخراج ثم يتم تحديدها كميا باستخدام الاغاروز الكهربائي للهلام. يتم فصل جزء DNA في Agarose بناءً على حجم المسام (أي تركيز agarose) ، والجهد المطبق ، والحجم الجزيئي لجزيء DNA وتشكل الحمض النووي.

تتحرك الجزيئات الأصغر إلى أسفل في الهلام أسرع من الجزيئات الأكبر ويحدث الفصل بناءً على حجم الحمض النووي. إذا تم تطبيق الجهد العالي ، فستكون الهجرة أسرع ولكن فصل أجزاء الحمض النووي لن يكون واضحًا. (Westermeier 2006). لذلك ، عادة ما يتم تطبيق 110 فولت لمدة 30-45 دقيقة لفصل شظايا الحمض النووي في الجل. أظهر الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز لجزيء الحمض النووي نطاقات مميزة في الممرات 4 و 5 و 6 مما يشير إلى وجود DNA واحد فقط في العينة.

مقدمة: حمض Doeoxy ribo النووي (DNA) عبارة عن بوليمر يتكون من قاعدة وسكر ورابطة فوسفاتية. يكون السكر دائمًا منزوع الأكسجين ريبوز في حالة الحمض النووي وستكون القاعدة عبارة عن جزيء بيورين أو بيريميدين: الأدينين أو الجوانين أو السيتوزين أو الثايمين. يربط جزيء الفوسفات بين النيوكليوسيدات. الحمض النووي هو بنية مرتبطة تساهميًا ذات شكل حلزوني. الحمض النووي هو بنية حلزونية مزدوجة تربطها روابط الهيدروجين. يحمل الحمض النووي المعلومات الجينية. . نظرًا لأن الحمض النووي حمضي بطبيعته ، فإنه يهاجر نحو القطب الموجب عند تعرضه لمجال كهربائي.

يتم تحديد ستة مسام من غربال الاغاروز بتركيز الاغاروز. المواد الهلامية Agarose مصنوعة بتركيز يتراوح من 0.7 إلى 1.5٪. الحمض النووي في محلول محايد سالب الشحنة. (ويليامسون وكامبل 1997). لذلك إذا تم تطبيق مجال كهربائي على الحمض النووي ، فسوف يتحرك باتجاه قطب الأنود من قطب الكاثود. بناءً على حجم الجزء ، سيكون معدل الهجرة متناسبًا عكسياً مع حجم الجزء. ستتحرك الأجزاء الأصغر بشكل أسرع من الأجزاء الأكبر ويتم قياس المسافة التي تتحركها الأجزاء باستخدام العلامة الجزيئية.

الواسم الجزيئي هو الأحجام القياسية لشظايا الحمض النووي التي تعمل كمعايير لقياس الوزن الجزيئي لشظايا الحمض النووي. وبالتالي ، من خلال توفير جهد ثابت في هلام الاغاروز ، يمكننا فصل شظايا الحمض النووي على أساس وزنها الجزيئي. (Westermeier 2006). Agarose Gel Electrophoresis للحمض النووي هو تقنية بسيطة للغاية وقابلة للتكرار. كانت حركة جزيء الحمض النووي في محلول محايد مستقلة عن حجم الجزء ولكنها تختلف باختلاف القوة الأيونية.

يمكن فصل شظايا الحمض النووي التي يصل وزنها إلى 40 كيلو زوج قاعدي باستخدام الاغاروز الكهربائي للهلام. (ويليامسون وكامبل 1997). يتم فصل شظايا الحمض النووي بناءً على الحجم الجزيئي والتيار المطبق وتركيز Agarose وتشكل الحمض النووي. Agarose هو عبارة عن بوليمر مشترك يحتوي على 1،3-D-galactose و 1،4-anhydro-؟ - L-galactose مرتبطة ببعضها البعض بواسطة مناطق الوصل وتربطها روابط الهيدروجين. (ستيل واجن 2009). يتم استخدام سلم قياسي لتحديد حجم الأجزاء. في


8 تعليقات

ربما اختراق بسيط من جنوب أفريقيا؟

- قص شريط الجل
- اصنع ثقبًا في الجزء السفلي من أنبوب PCR 0.5 مل بإبرة قياس صغيرة ساخنة.
- ضع رزمة صغيرة من صوف حوض السمك المضغوط في قاع الأنبوب (يمكن استخدام ملاقط)
- ضع شريط الجل في أنبوب PCR (اعتدت على تقطيعه) ، وقطع الغطاء ، لكن اترك بعض الموصل قيد التشغيل.
- ضع في أنبوب أكبر 1.5 مل ، وجهاز طرد مركزي بسرعة عالية لمدة دقيقة. سيتعين عليك & # 8217 ترتيب الأغطية كما يمكنك & # 8217t إغلاقها باستخدام أنبوب PCR.
- قم بتشكيل الحجم باستخدام المخزن المؤقت
- P: C نظيفة ، تترسب مع الإيثانول.
- كله تمام

نشره ليام طومسون في 18 أغسطس 2016

مرحبا راف ،
لست متأكدا من الجلسرين. لم نجرب ذلك & # 8217t. نظريتي هي أن السلاسل الطويلة لـ PEG ستساعد في حبس الحمض النووي ، ولن تحصل على ذلك بجزيء صغير مثل الجلسرين.

ولكن كما يقول المثل ، فإن الممارسة النظرية تشبه النظرية تمامًا ، لكنها في الواقع ليست كذلك. لذا إذا حاولت تجربته ، فالرجاء إخبارنا بما سيحدث!

بقلم جون شلويندورن في 29 يوليو 2015

هل سيكون الجلسرين على ما يرام بدلاً من PEG8000؟

نشره راف في 22 يوليو 2015

مقال رائع ، سأحاول قريبًا.

بقلم لي في 22 يوليو 2015

شون ،
أنا استخدم TBE. في يدي ، لا يمكنني إبقاء الحمض النووي في البئر لفترة كافية لاستعادته ، في تشغيل المخزن المؤقت وحده. (أو على الأقل أنا & # 8217 لم أنجح أبدًا في التوقيت الصحيح ، حاولت مرة أو مرتين فقط). لذلك أنا & # 8217 أضفت دائمًا 20٪ PEG. لم أحاول استنساخه أبدًا باستخدام PEG هناك. لقد استخدمت دائمًا ترسيب الإيثانول لتنظيفه.
في صحتك،
يوحنا

بقلم جون شلويندورن في 10 يوليو 2014

مدونة رائعة. باعتباري شخصًا يحاول حاليًا تنقية الحمض النووي من المواد الهلامية agarose من أجل الاستنساخ الفرعي ، فأنا أعرف الصداع الذي يمكن أن ينتج عن استخدام مجموعات Gel Purification. كان لدي سؤال سريع عن طريقة التحويل الكهربائي لأنبوب غسيل الكلى ، بعد إخراج الحمض النووي من الجل ووضعه في المخزن المؤقت قيد التشغيل (نستخدم TAE) ، هل هو جاهز للاستخدام في تطبيقات المصب (أي الاستنساخ الفرعي)؟ أو هل سأحتاج إلى عمل شكل من أشكال ترسيب الحمض النووي؟

بقلم شون في 03 يوليو 2014

هيه ، شكرا نيكول. نعم أتذكر شعور & # 8220am أنا مجنون & # 8221 من مدرسة غراد بوضوح. اعتقدت أن شخصًا ما يجب أن يقول ذلك -)

نأمل أن يساعد هذا جميع طلاب الدراسات العليا الذين يشعرون بالجنون هناك على رؤية الضوء في نهاية النفق. عدد الأشياء التي يمكن أن تسوء كبير ، لكنه محدود. بعد حدوث ما يكفي منها ، ستصبح الأمور أكثر موثوقية بشكل ملحوظ.

بقلم جون شلويندورن في 13 يونيو 2014

هذه المدونة تتفوق على جميع منتديات البيولوجيا الجزيئية التي زرتها على الإطلاق! شكرا لك! أتمنى لو كان هذا موجودًا عندما كنت طالبًا في السنة الأولى في التخرج.

إنني أقدر حقًا أنك تواجه كل الأشياء الشائعة & # 8211 التي لم تتحدث عنها أبدًا - أشياء غريبة تحدث أثناء الاستنساخ ومع استخدام أنواع معينة من مجموعات الحمض النووي. كنت أشعر بالجنون قليلاً ، لكنني الآن أعرف أن كل هذه الأشياء طبيعية ، حتى لو لم يتم الكشف عنها في البروتوكولات أو الكتيبات.


"Agarose Gel Electrophoresis of Dna Biology Lab Report" مقالات وأوراق بحثية

KOLEJ MATRIKULASI MELAKA 78300 MASJID TANAH ، إرشادات MELAKA مادة الاحياء التجارب 1.0 الحضور 1.1 الحضور إلى الجلسات العملية إلزامي. 1.2 إذا لم تتمكن من الحضور إلى الفصل بسبب اعتلال صحتك أو أعذار طارئة ، يرجى إبلاغ المحاضر EARLIER حتى يمكن ترتيب جلسة عملية أخرى لك في نفس الأسبوع. 2.0 مختبر معطف 2.1 يرتدي مختبر المعطف إلزامي. 2.2 ارتدِ مختبر معطف طوال الفصل. 3.0 Jotter 3.1 يجب أن يحتوي Jotters على ملخص للإجراءات.

رسم تقني ممتاز ، رسم بياني ، نشر 690 كلمة | 3 صفحات

معمل البروتين الأخضر الفلوريسنت

يستخدم اللوني (HIC) لتنقية البروتين الأجنبي. بروتين هلام الكهربائي يستخدم لفحص وتحليل البروتين النقي. يستخدم علماء الأبحاث البروتين الفلوري الأخضر (GFP) كعلامة رئيسية أو علامة للتعرف على مادة الاحياء من الخلايا الفردية والكائنات متعددة الثقافات. هذه مختبر يقدم طريقة سريعة لتنقية GFP المؤتلف باستخدام HIC. بمجرد تنقية البروتين ، يمكن تحليله باستخدام عديد السكاريد هلام الكهربائي (صفحة). الغرض: توضيح عملية التحول.

بروتين ممتاز ، بروتين فلوري أخضر ، البيولوجيا الجزيئية 1693 كلمة | 7 صفحات

تقرير معمل

علم الأحياء الدقيقة - 2460 مختبر- 003 31 مارس 2008 مختبر تقرير- الإشريكية القولونية الخلاصة الغرض من ذلك مختبر أبلغ عن هو التعرف على بكتيريا غير معروفة والإبلاغ عنها والتي تسببت في إصابة المريض بألم أسفل البطن والحوض. للتعرف على هذه البكتيريا غير المعروفة ، يلزم إجراء العديد من الاختبارات البيوكيميائية من أجل وصف الدواء الصحيح لعلاج وعلاج الأعراض. مقدمة في أ مختبر اليوم ، سأحدد نوعًا من البكتيريا غير المعروفة.

البكتيريا المتميزة ، البكتيريا المتولدة ، الإشريكية القولونية 1053 كلمة | 5 صفحات

مثال على مقال تقرير مختبر البروتين البيولوجي

الملخص الهدف من هذا مختبر كان قياس كمية البروتين من قطعة من كبد البقر. تم ذلك عن طريق أخذ الكبد ومزجها ثم استخدام جهاز طرد مركزي لفصل المادة الطافية عن الحبيبات. بمجرد اكتمال ذلك ، تمت إضافة كبريتات الأمونيوم إلى المادة الطافية ، ثم تبريدها ثم عصرها للمرة الثانية. بعد ذلك ، يضاف 20 مل من الماء إلى الحبيبات وتقليبها وتسجيل الحجم. حسبت المعلمة الكتلة الكلية للكبد لتكون 10.098 جم. أخيرا طيفي.

1109 كلمة مميزة | 5 صفحات

تقرير معمل

مختبر أبلغ عن مقدمة: في التغيير الكيميائي ، تتغير هويات المواد وتتشكل مواد جديدة. في المعادلة ، المواد الموجودة على اليسار هي المتفاعلات. المواد الموجودة على اليمين هي المنتجات. الهدف من هذه التجربة هو مراقبة الدليل على حدوث تغيير كيميائي. استنتج من الملاحظات أن مادة جديدة قد تشكلت. تحديد وتسجيل الملاحظات التي تظهر أن الطاقة متورطة في التغيير الكيميائي ، ومراقبة اللون ، وقابلية الذوبان لبعض المواد.

نحاس ممتاز ، كلور ، حمض الهيدروكلوريك 702 كلمة | 3 صفحات

تقرير معمل Gmo

الكائنات المعدلة وراثيا مقدمة: الغرض من هذا مختبر تحديد ما إذا كانت المنتجات الغذائية غير الموسومة هي بالفعل أطعمة معدلة وراثيًا. قبل أن نبدأ في اختبار هذه النظرية ، كان علينا أولاً أن نفهم الكائنات المعدلة وراثيًا بشكل عام. كان هذا سهلاً إلى حد ما لأنه إذا كنت قد ذهبت إلى أي متجر بقالة مؤخرًا ، فلديك بلا شك منتجات ذات ملصقات تقول & quot ؛ خالية من الكائنات المعدلة وراثيًا & quot ؛ أو حتى & quot ؛ تحتوي فقط على مكونات غير معدلة وراثيًا. & quot ؛ يقف GMO في الواقع.

الهندسة الوراثية المتميزة ، الحمض النووي ، تفاعل البلمرة المتسلسل 2784 كلمة | 12 صفحة

تقرير معمل

مختبر تقرير: العناصر المتفاعلة مختبر 27 أكتوبر 2011 كلير إليزابيث مختبر الشركاء: هانا التوقيع: ___________________ مقدمة- صودا الخبز والخل مادتان شائعتان موجودتان في كل منزل تقريبًا. هذا ، بالإضافة إلى حقيقة أن جميع مواد البدء والتشطيب غير خطرة وآمنة ، وهذا هو السبب في أن هذا هو أحد التفاعلات الكيميائية الأولى التي يتعرض لها العديد من الأشخاص. الغرض من هذه التجربة هو اختبار أي من المتفاعلين (الخل وصودا الخبز) ) هو محدود.

القوة الممتازة ، الخل ، أسيتات الصوديوم 579 كلمة | 3 صفحات

مادة الاحياء

الفصل 8: التكاثر الخلوي - خلايا من الخلايا 1. ما هي الأدوار الثلاثة الهامة لانقسام الخلية؟ 2. قارن بين التكاثر الجنسي واللاجنسي. 3. فرق بين المصطلحات: الحمض النووي، الجين ، الكروموسوم ، الكروموسوم المكرر ، الكروماتيد الشقيق والنترومير. 4. ما هي مرحلتي دورة الخلية؟ ما هي المراحل الثلاث للطور البيني؟ 5. الانقسام الخيطي هو تقسيم ______ ، بينما الحركية الخلوية هو تقسيم ______. 6. وصف المظهر.

الوراثة المتميزة ، RNA ، الجين 1569 كلمة | 7 صفحات

تقرير معمل

مقدمة: في هذا التمرين المخبري استكشاف الاختلافات بين الكائنات الحية الدقيقة ومواصلة استخدامنا للوسائط المتخصصة واستخدام بعض الاختبارات الكيميائية الحيوية. أبلغ عن يكشف عن الأدوات المختبرية الأساسية التي سيتم استخدامها في كل من ممارساتنا. ومن الأهمية بمكان التعرف على الأدوات المختلفة والأدوات المختبرية وتحديدها ، لأننا بهذه الطريقة سنتمكن من استخدامها بشكل صحيح وأيضًا تسميتها بالاسم و تعرف لماذا. استمع اقرأ قاموسًا صوتيًا - عرض.

ماء ممتاز ، بكتيريا ، بكتيريا ، 527 كلمة | 3 صفحات

معمل استخراج الحمض النووي

الهدف: الغرض من هذا مختبر هو السماح لك بالتعرف على إجراء الاستخراج الحمض النوويجمع الحمض النووي العينات ، ومراقبة الخصائص الفيزيائية لـ الحمض النووي الخلفية: الفراولة البرية ثنائية الصبغيات لأنها تحتوي فقط على مجموعتين من الكروموسومات. في حين أن نوع محل البقالة هو نوع من الأخطبوط لأنه يحتوي على ثماني مجموعات من الكروموسومات. سبب اختيارنا الفراولة في متجر البقالة هو أننا سنكون قادرين على استخراج المزيد الحمض النووي. تصنع الفراولة الناضجة الإنزيمات التي تساعد على التكسير.


10. أزل الحمض النووي الخاص بك مع محلول شطف ساخن

سيؤدي تسخين المخزن المؤقت للشطف إلى 70 درجة مئوية قبل تطبيق العينة على العمود إلى إطلاق المزيد من الحمض النووي من الغشاء ، مما يؤدي إلى إنتاجية أعلى. إن السماح للمخزن المؤقت بالجلوس على العمود لمدة 5 دقائق قبل الطرد المركزي يمكن أن يساعد أيضًا في زيادة العائد.

يعد استخراج الحمض النووي من مادة هلامية خطوة أساسية في معظم مشاريع الاستنساخ والتسلسل. لا يجب أن يكون & # 8217t عنق الزجاجة للوصول إلى العمل الحقيقي للتعبير عن البروتين أو التنميط الجيني للحمض النووي الخاص بك. من خلال هذه النصائح البسيطة ، سيكون استخراج الجل بمثابة نزهة في الحديقة ، مما يرسلك في طريقك إلى نجاح الربط في أي وقت من الأوقات!

نُشر في الأصل في 12 نوفمبر 2007. تم التحديث والمراجعة في مايو 2017.


استعادة الحمض النووي من المواد الهلامية Agarose

غالبًا ما يتم استخدام الحمض النووي المرحل من خلال المواد الهلامية agarose كقالب أولي أو نموذج إعادة تضخيم لتفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) وكذلك للتهجين والتسلسل والربط والعديد من التقنيات الجزيئية الأخرى. لاستعادة الحمض النووي ، يتم استئصال النطاق المعني بمشرط معقم ويتم استخراج الحمض النووي بوسائل مختلفة. تشمل الممارسات الشائعة الاستخراج العضوي بالفينول والكلوروفورم ، واستخدام أجهزة التلوين الكهربائي ، وطرق "التجميد والضغط" ، وطرق "السحق والنقع" وعدد قليل من تقنيات الدوران المختلفة. تتضمن تقنية التجميد والضغط تجميد قطعة الهلام في النيتروجين السائل داخل طرف ميكروبيبيتي [1] أو أنبوب الطرد المركزي [2] ، وتدوير السائل عن طريق الطرد المركزي ، بينما تتضمن طريقة السحق والنقع إضافة المخزن المؤقت إلى شريحة الاغاروز قبل سحقها بقضيب زجاجي. يتم وضع الملاط عند 37 درجة مئوية لعدة ساعات قبل أن يتم طرد العينة من خلال الصوف الزجاجي السليكوني أو ألياف البوليومير غير السامة.


طريقة داخلية سريعة وفعالة لتنقية الحمض النووي من هلام الاغاروز ، ومناسبة للتسلسل

تسلسل شظايا الحمض النووي (على سبيل المثال ، ITS ، 16S ، 18S ، جينات معينة ، والواسمات الجزيئية) مطلوب بشكل متزايد في الدراسات حول التنوع الميكروبي ، والتعداد الجيني الجرثومي والتطور ، وتسلسل الأليلات ، والبحث عن SNPs ، من بين أمور أخرى. إن تكلفة الحصول على هذه الدنا ، من حيث الكمية والنوعية للتسلسل ، مرتفعة لأنها تتضمن مجموعات خاصة لاستعادة الدنا من الهلام بعد تفاعل البوليميراز المتسلسل ، أو استنساخ وتنقية البلازميدات بمجموعات تجارية. تتطلب الدراسات السكانية وغيرها من الدراسات تحليلات العديد من العينات ، وبالتالي فإن التكلفة العالية تمثل عقبة أمام تنفيذ مثل هذه المشاريع في البلدان التي يوجد فيها تنوع بيولوجي كبير ، مثل البلدان النامية الاستوائية وشبه الاستوائية ، حيث تكون الأموال محدودة. تعديل طريقة معروفة بالفعل لاستعادة الحمض النووي من الهلام ، يتم تقديم أول بروتوكول داخلي لاستعادة الحمض النووي مناسب للاستخدام المباشر في التسلسل هنا. هذا البروتوكول قابل للتطبيق على نطاق واسع على الحمض النووي من جميع الكائنات الحية المختلفة ، مثل البكتيريا والفطريات والنباتات. تجعل بساطته وسرعته وتكلفته المنخفضة هذا الإجراء قابلاً للتسلسل عالي الإنتاجية للحمض النووي كما هو مطلوب في الدراسات السكانية الميكروبية ، وتطوير الواسمات الجزيئية ، والتعرف الجزيئي للسلالات في المجموعات الميكروبية ، وغيرها. تعد استعادة أجزاء الحمض النووي من هلام الاغاروز واحدة من أكثر المهام شيوعًا في مختبرات البيولوجيا الجزيئية. ولذلك ، فإن إمكانية تطبيق البروتوكول المقدم هنا هائلة.

الكلمات الدالة: الحمض النووي لتسلسل تنقية الحمض النووي من أعمدة الهلام الرئيسية تدور بطريقة منخفضة التكلفة.

بيان تضارب المصالح

يعلن الكتاب لا تضارب المصالح.

الأرقام

مقارنة استعادة الحمض النووي من ...

مقارنة استعادة الحمض النووي من الهلام بين الطرق المختلفة. أ الحمض النووي الأولي ، قبل ...

اختبار تضخيم PCR للتنقية ...

اختبار تضخيم PCR للحمض النووي المنقى. تم إجراء الاختبار بواسطة Nested PCR على…

مقارنة جودة تسلسلات الحمض النووي ...

مقارنة جودة تسلسل الحمض النووي المنقى بطرق مختلفة. مخرجات نقاط الجودة المحترقة ...

تمثيل رسومي لمحاذاة متعددة بواسطة ...

تم الحصول على تمثيل رسومي للمحاذاة المتعددة بواسطة برنامج Geneious الإصدار 8.1.5 لتسلسل الحمض النووي ...


الاغاروز الهضم:

هذا الإجراء سوف يهضم ما يصل إلى 200 وميكرول من 1٪ نقطة انصهار منخفضة [اغروس). لأحجام أكبر ، اضبط الإنزيم وفقًا لذلك.

  1. قم بموازنة agarose ذات نقطة الانصهار المنخفضة المحتوية على الحمض النووي (SeaPlaque GTG أو NuSieve GTG) عن طريق غسل شريحة الهلام الصلب مرتين بمجلدين من 1X b-Agarase I Buffer على الجليد لمدة 30 دقيقة لكل منهما. *
  2. إزالة المخزن المؤقت المتبقية وإذابة [اغروس) عن طريق الحضانة في 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
  3. تبرد إلى 42 درجة مئوية واحتضان الاغاروز المنصهر مع وحدة واحدة من بيتا-أغاراس 1 عند 42 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. انتقل إلى تنقية الحمض النووي.

تنقية الحمض النووي:

  1. اضبط تركيز الملح لمحلول & beta-Agarase I المعالج لترسيب الأيزوبروبانول للحمض النووي (0.5 M NaCl ، 0.3 M NaOAc ، 2.5 M NH4OAc أو 0.8 M LiCl).
  2. يبرد على الجليد لمدة 15 دقيقة.
  3. جهاز طرد مركزي بجرعة 15000 X جم لمدة 15 دقيقة لتكوير أي كربوهيدرات متبقية غير مهضومة.
  4. إزالة المادة الطافية المحتوية على الحمض النووي. يترسب مع مجلدين من الأيزوبروبانول. لضمان عوائد كمية لكميات صغيرة من الحمض النووي (& لتر 100 نانوغرام) ، يمكن إضافة الحمض النووي الريبي الناقل (1 & ميكروغرام) إلى المحلول.
  5. تخلط جيدا وتبريد وطرد مركزي عند 15000 X جم لمدة 15 دقيقة.
  6. قم بإزالة المادة الطافية ، واغسل الحبيبات بماء بارد 70٪ أيزوبروبانول وجفف الحبيبات في درجة حرارة الغرفة.
  7. يمكن إعادة تعليق الحبيبات في TE أو أي مخزن مؤقت ضروري للمعالجة اللاحقة.

للحصول على حل أسرع ، يمكن استخدام مجموعة Monarch DNA Gel Extraction Kit (NEB # T1020) لاستخراج الحمض النووي من المواد الهلامية agarose.


تحقق من المزيد من بيانات الأداء واطلب عينة مجانية

أشرطة فيديو

بروتوكول طقم استخراج جل الحمض النووي من مونارك وريج

تعرف على كيفية استخراج الحمض النووي من المواد الهلامية agarose باستخدام مجموعة Monarch DNA Gel Extraction Kit.

نصائح لاستخدام طقم استخراج جل DNA Monarch & reg

قم بتحسين استخلاص هلام الحمض النووي الخاص بك من خلال نصائحنا السريعة لاستخدام مجموعة Monarch DNA Gel Extraction Kit.

كيفية إعادة تدوير مكونات Monarch & Reg Kit

تعرف على كيفية إعادة تدوير جميع المكونات الموجودة في أطقم Monarch الخاصة بك بسهولة.


شاهد الفيديو: gkm - DNA Extraction. استخلاص الحامض النووي الرايبي منقوص الأوكسجين دنا (يونيو 2022).


تعليقات:

  1. Mikinos

    لحظه طريفه

  2. Tavio

    يرجى مراجعة رسالتك

  3. Kedric

    شكرا على الدعم.



اكتب رسالة